cck8实验步骤及注意事项
步骤:首先制作标准曲线(测定细胞具体数量);其次进行细胞活性检测;最后进行细胞增殖-毒性检测。注意事项:先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
一. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)
1、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
2、按照比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞的数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件必须要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
二. 细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞的悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。
2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡)
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。