鉴定蛋白质时双缩脲试剂B液为什么不能过量（鉴定蛋白质）

1、凯氏定氮法

2、凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮含量的方法。即在催化剂的存在下，样品中的有机氮用浓硫酸消化转化为无机铵盐，然后铵盐在碱性条件下转化为氨，用水蒸气蒸馏出来，用过量的硼酸溶液吸收，再用标准盐酸滴定，计算出样品中的氮含量。

3、因为蛋白质中的氮含量是相对恒定的，所以可以从其氮含量计算出蛋白质的含量，所以这种方法是一种经典的蛋白质定量方法。

4、缩二脲法

5、缩二脲法是一种分析方法，用于鉴定蛋白质。缩二脲试剂是一种碱性含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。

6、当底物含有肽键(多肽)时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。浓度可通过比色法分析，紫外-可见光谱中的波长为540nm。识别反应的灵敏度为5-160毫克/毫升。反应蛋白单位为1-10毫克。

7、苯酚试剂法

8、取6支试管，分别贴上标签。前五个试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液。最后一个试管加入待测蛋白溶液，没有标准蛋白溶液。在室温下放置30分钟。以第一个不含蛋白溶液的试管为空白对照，在650nm波长处测量每个试管中溶液的吸光度。

9、紫外线吸收法

10、大多数蛋白质在280nm波长处具有特征性的最大吸收，这是由于蛋白质中存在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。可用于测定0.1 ~ 0.5 mg/ml蛋白质溶液的含量。

11、取9支试管，分别贴上标签。前8个试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，第一个试管不加入标准蛋白溶液，最后一个试管加入待测蛋白溶液，不加入标准蛋白溶液。每个试管中的液体总量是通过加入蒸馏水来弥补而保持一致的。将液体混合均匀，在280nm波长下进行比色分析，记录吸光度值。

12、科斯亮蓝法

13、考马斯亮蓝显色法的基本原理是蛋白质能与考马斯亮蓝G-250定量结合。考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，其可见光最大吸收峰从465nm变为595nm。

14、当考马斯亮蓝G-250的浓度过量且恒定时，当溶液中蛋白质的浓度不同时，不同量的考马斯亮蓝G-250会从465nm的吸收峰形式变为595nm的吸收峰形式，这种变化有一定的定量关系。

15、一般来说，当溶液中蛋白质的浓度增加时，显色溶液在595nm处的吸光度基本上可以线性增加。因此，考马斯亮蓝G-250显色法可用于测定溶液中蛋白质的含量。