pcr终点法
等个旧人
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所谓real-time Q-PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,DNA聚合酶的失活,dNTP和引物的枯竭,反映副产物焦磷酸对合成反应的阻害等原因,最终PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。在传统的PCR中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的最终扩增产物,因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。
理想三旬 2024-04-26 12:42:19
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