提取dna的原理及步骤 提取的dna都有哪些用途

CTAB法提取DNA的原理、步骤及注意事项

提取dna的原理及步骤 提取的dna都有哪些用途

主要提一下CTAB法提取植物基因组DNA原理。

1 将植物组织置于2 mL离心管，加入2颗灭菌钢珠，液氮冷冻，球磨仪研碎；

2 加入800 μL CTAB提取缓冲液，65℃水浴1 h，期间每隔15 min颠倒混匀若干次；

提取dna的原理及步骤 提取的dna都有哪些用途

说明：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、 多糖、酚 类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

Tris-HCl

提供缓冲环境，防止核酸被 破 坏。

EDTA

抑制DNase活性。

NaCl

提供高盐环境，使DNA充分溶解。

β-巯基乙醇

抗氧化剂，去除酚、糖，能与酚形成络合物，也可与糖结合。

3 加入800 μL苯酚：氯仿：异丙醇（25:24:1），上下颠倒混匀，12000 rpm离心10 min，将上层水相转移至新的2 mL离心管；

4 加入等体积氯仿：异丙醇（24:1），上下颠倒混匀，12000 rpm离心10 min，将上清转移至新的1.5 mL离心管；

说明：原理同上一步，抽提更彻底。

5 加入0.6倍体积异丙醇，-20℃沉淀30 min以上；

说明：异丙醇用来沉淀DNA，沉淀所需体积小，但难挥发。

6 12000 rpm离心10 min，弃去上清，加入75%乙醇洗涤两次；

说明：其实乙醇也可用于DNA的沉淀，其虽易挥发，但所需体积大，因此普遍使用异丙醇沉淀，然后用乙醇洗涤除去残留的异丙醇。另外，DNA不溶于乙醇，但CTAB和一些蛋白质可溶，低温乙醇还可抑制DNase活性，降低分子运动，易于DNA沉淀。

7 真空干燥仪干燥40 min左右，加水溶解DNA。

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DNA提取的原理？

原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA.2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA.3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色.方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌,稍快,稍重.5 min2．溶解DNA：3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300.

DNA怎么提取？

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。

提取DNA总的原则:

1.保证核酸一级结构的完整性；

2.核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；

3.其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；

4.其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

例如 : 用酶法提取

DNA提取分为三个基本步骤，每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

工具/原料: 研磨棒、研磨仪或者组织破碎仪 , 氯仿：异戊醇（24:1）或者蛋白酶 , RNA酶 , 酒精 , 冰箱

方法/步骤 :

使用研磨仪、研磨棒或者使用超声破碎细胞的方法破碎细胞，加入去污剂，如sds等，除去膜脂。

去除细胞内的蛋白质，包括与DNA结合的组蛋白，通过加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚／氯仿抽提等方法去除。

加入RNA酶去除RNA，如实验不严密，可省略此步。

沉淀DNA，需在冷乙醇或异丙醇中沉淀，放在冰箱-20℃沉淀30分钟以上，原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起发生沉淀。

总结: DNA提取方法有下面⑦种

一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

CTAB 法提取DNA的原理和步骤？

1）取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中；

（2）加入800 μl的CTAB提取缓冲液,混匀（CTAB在65℃水浴预热）,每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min；

（3）小心吸取上清液,加入等体积的酚：氯仿（各400μl）溶液,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min；

（4）小心吸取上清液,加入等体积的氯仿,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min.

（5）重复步骤（4）1-2次,以蛋白层不出现为止；

（6）取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,离心10 min；

（7）弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀2次；

（8）室温下干燥后（一般干燥5-15 min）,溶于30-50 μl DEPC去离子水中,于-20℃或者-70℃下保存备用.