pcr反应液基本组成
精选回答
懂得自己 2024-04-22 16:42:20
PCR反应体系由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。
设计PCR引物时的一般原则:
(1)引物长度一般15~ 30碱基,过短则特异性低 过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增。
(2) 避免内部二级结构,避免序列内有较长的回文结构,使引物自身不能形成发夹结构。
(3) G/C 和A/T 碱基均匀分布,G/C 含量在45%~ 55% 之间,引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布,避免嘌呤、嘧啶的连续排列。
(4) 要避免两个引物间特别是3 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3 末端的序列互补,使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。
(5) 引物3 端碱基一般应与模板严格配对,并且3 端为G、C 或T 时引发效率较高。
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