鉴定蛋白质的方法高中生物（鉴定蛋白质）

1、凯氏定氮法

2、凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮含量的方法。即在催化剂的存在下，样品用浓硫酸消化，将有机氮全部转化为无机铵盐，然后铵盐在碱性条件下转化为氨，用水蒸气蒸馏，用过量的硼酸溶液吸收，再用标准盐酸滴定，计算出样品中的氮含量。

3、由于蛋白质中的氮含量相对恒定，可以由氮含量计算出蛋白质含量，因此该方法是一种经典的蛋白质定量方法。

4、缩二脲法

5、缩二脲法是一种用于鉴定蛋白质的分析方法。缩二脲试剂是一种碱性含铜试液，颜色为蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。

6、当底物含有肽键(多肽)时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。浓度可通过比色法分析，紫外-可见光谱中的波长为540nm。识别反应的灵敏度为5-160毫克/毫升。鉴定反应的蛋白质单位为1-10毫克。

7、苯酚试剂法

8、6个试管分别贴上标签，前5个试管加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一个试管加入待测蛋白溶液，不加标准蛋白溶液，室温放置30分钟。第一个不含蛋白溶液的试管作为空白对照，在650nm波长处测定每个试管中溶液的吸光度值。

9、紫外线吸收法

10、大多数蛋白质在280nm波长处有特征最大吸收，这是由于蛋白质中存在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，可用于测定含量为0.1 ~ 0.5 mg/ml的蛋白质溶液。

11、取9支试管，分别贴上标签。在前8个试管中加入不同浓度的标准蛋白溶液，第一个试管不加标准蛋白溶液，最后一个试管不加标准蛋白溶液加入待测蛋白溶液。每个试管中的液体总量是一致的，通过加入蒸馏水来补足。将液体混合均匀，在280nm波长下进行比色，记录吸光度值。

12、考马斯亮蓝法

13、考马斯亮蓝显色法的基本原理是蛋白质能与考马斯亮蓝G-250定量结合。当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合时，其可见光最大吸收峰从465nm变为595nm。

14、当考马斯亮蓝G-250过量且浓度不变时，溶液中蛋白质的浓度不同时，不同量的考马斯亮蓝G-250会从吸收峰在465nm的形式变为吸收峰在595nm的形式，这种变化有一定的定量关系。

15、一般来说，当溶液中蛋白质的浓度增加时，显色溶液在595nm处的吸光度基本上可以线性增加，因此可以用考马斯亮蓝G-250来测定溶液中蛋白质的含量。