pcr扩增的原理和步骤
pcr技术的原理和DNA的天然复制过程类似,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物和DNA的半保留复制。
1、高温进行变性。将模板DNA加热至95℃左右,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链进行DNA解离,令其成为单链,方便它和寡核苷酸引物进行结合。
2、低温进行退火(复性)。将温度控制在55℃左右,将变性后的单链与寡核苷酸引物通过碱基互补配对,再次形成局部双链。
3、中温进行延伸。将温度控制在75℃左右,在TaqDNA酶的作用下,以靶序列作为模板,碱基互补配对作为原则,用dNTP作为其原料,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。