bca法测蛋白浓度原理

bca法测蛋白浓度原理：在碱性环境中，蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+(biuretreaction)。bca与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，可测定蛋白质浓度。因为蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大分子之一，承担着各种生物功能。

有关bca法测蛋白浓度的相关操作：1、按试剂盒说明书配置BCA工作液。2、完全溶解蛋白质标准品，加到96孔板的蛋白标准品孔中，按照说明书要求对标品进行梯度释，加入BCA工作液，用酶标仪测定其吸光度。3、以样品浓度为X轴，吸光度为Y轴，绘制标准曲线。4、待测样品中加入BCA工作液，测定吸光度，带入标准曲线中，计算样品浓度。除了bca法测蛋白浓度外，还有其他方法可以测试蛋白浓度。1、考马斯亮蓝法(Bradford)法原理：考马斯亮蓝G-250(CoomassiebrilliantblueG-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm。当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。2、斐林—酚试剂(Lowry)法：斐林(Folin)-酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应，其中包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质-铜络合物。第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关，在650nm波长下有最大光吸收。