动物细胞培养人造皮肤(动物细胞培养)
烟岭寂静
精选回答
1、复苏,将冻存管从液氮中取出,立即放入37水浴锅中,轻轻摇晃。待液体融化后(约1-1.5分钟),取出,喷点酒精,放在洁净的工作台上。
2、将细胞悬液吸入装有10ml培养基的15ml离心管中(用培养基冲洗冻存管一次,洗掉所有贴壁细胞),1000 rpm离心5分钟。倒出上清液,加入1ml培养基悬浮细胞。
3、吸取到10cm培养皿中,加入10ml培养基,轻轻前后左右摇动,使培养皿中的细胞分布均匀。标注细胞类型和日期、培养人姓名等。放入CO2培养箱中培养,待细胞贴壁后更换培养基。每3天更换一次培养基。
4、传代,当培养皿中细胞覆盖率达到80%-90%时,需要传代。吸掉原来的培养基。加入适量胰蛋白酶(只要能覆盖细胞)消化1-2分钟。细胞变圆后,加入等体积的含血清培养基停止消化。用吸管吹细胞。
5、暂停细胞。将细胞吸入15ml离心管中,并以1000 rpm离心5分钟。倒出上清液,加入1-2ml培养基,将细胞全部吹爆。根据细胞类型将细胞转移到几个培养皿中。一般有5个癌细胞,3个正常细胞。继续培养。
6、冷冻,消化细胞,离心(同上)。用配制好的冻存液悬浮细胞,分装于已灭菌的冻存管中,静置几分钟,注明细胞类型和冻存日期。430min,-2030min,-80过夜,然后保存在液氮中冲洗。
7、冻存液的制备:70%完全培养基20?%DMSO。DMSO应缓慢加入,同时滴加并摇动。
带刺的玫瑰 2023-12-18 16:48:18
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